Métodos Cromatográficos
La cromatografía es un método físico de separación de los componentes de una mezcla mediante su distribución diferencial entre dos fases: una fase estacionaria (inmóvil) y una fase móvil (un fluido que percola a través de la primera).
Las técnicas cromatográficas se dividen principalmente según cómo se disponga la fase estacionaria.
Clasificación principal
Cromatografía plana
La fase estacionaria se coloca sobre una superficie plana o un soporte de papel:
- Cromatografía en papel: utiliza papel especial como lecho estacionario y un disolvente como fase móvil.
- Cromatografía en capa fina (TLC / CCF): la fase estacionaria es una fina capa de un sólido (como gel de sílice) extendida sobre una placa de vidrio o de plástico.
Cromatografía en columna
La fase estacionaria se encuentra confinada dentro de una columna cilíndrica. Se subdivide según la naturaleza de la fase móvil:
- Cromatografía de líquidos (LC / HPLC): emplea un líquido como fase móvil para separar compuestos disueltos (por ejemplo, la cromatografía líquida de alta resolución o HPLC).
- Cromatografía de gases (GC): emplea un gas inerte (como helio o nitrógeno) como fase móvil para separar sustancias volátiles o vaporizables.
- Cromatografía de fluidos supercríticos (SFC): utiliza un fluido en estado supercrítico (como dióxido de carbono) como fase móvil.
Mecanismos de separación
Según la interacción fisicoquímica entre los componentes de la muestra y las fases, la separación puede deberse a:
- Adsorción: competencia por los sitios activos de una superficie sólida.
- Partición: distribución entre dos fases líquidas inmiscibles.
- Intercambio iónico: atracción electrostática según la carga de los iones.
- Exclusión molecular: separación por tamaño o peso molecular (los más grandes salen primero).
- Afinidad: unión altamente específica y reversible (p. ej., antígeno-anticuerpo o enzima-ligando).